雙酚A檢測液相色譜法

  雙酚A，也稱BPA，是一種廣泛應用于塑料制造的化學物質，主要用于生產聚碳酸酯（PC）、環(huán)氧樹脂等多種高分子材料，被廣泛用于生產化工產品和食品相關產品，如嬰兒奶瓶、餐具、微波爐器皿、食品包裝容器的涂層、飲料瓶以及供水管道等。研究顯示，雙酚A是一類具有雌激素樣活性的內分泌干擾物，可能誘發(fā)兒童性早熟或致癌。

  自2011年3月1日起，歐盟成員國禁止使用含雙酚A的塑料生產嬰兒奶瓶，并從6月1日起禁止進口此類塑料嬰兒奶瓶。針對雙酚A安全性問題，現(xiàn)已將雙酚A檢測液相色譜法普遍應用。

雙酚A檢測液相色譜法實驗準備：

試劑：甲醇：色譜純

   乙酸、無水乙醇：分析純

   水：超純水（符合實驗室一級用水）

   雙酚A標準物質：純度＞99.0%

儀器：LC-10Tvp液相色譜儀

   SPD-10Tvp紫外檢測器

   手動進樣閥

   電子天平

   超聲波清洗器

   超純水機

   恒溫水浴鍋

雙酚A檢測液相色譜法分析條件：

 色譜柱：C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)

 流動相：甲醇+水=75+25

 流速：0.7mL／min

 柱溫：30℃

 檢測波長：224nm

  進樣量：20μl

 標準溶液的配置

  雙酚A標準儲備液：稱取適量的雙酚A標準物質，用甲醇稀釋，配置成濃度為1000μg/ml的雙酚A儲備液。

  雙酚A標準供試液：使用時用3%乙酸溶液稀釋成濃度為1.0μg/ml的溶液. 

樣品前處理

  稱取5g的樣品，將其剪成5×5mm的小碎片，置于250ml的三角燒瓶中，加入100mL的甲醇，50℃下超聲提取2小時，過濾至250mL雞心瓶，旋轉蒸發(fā)至干，用5mL水漩渦洗脫，待凈化。

樣品濃縮和凈化

E固相萃取小柱

活化、平衡：10 mL甲醇，10 mL水依次過柱；

上樣：在水到達小柱上層篩板時，加入待凈化液；

淋洗：6 mL水合10 mL 30%甲醇水溶液依次淋洗小柱，流出液棄去；

洗脫：6 mL 50%乙腈水溶液洗脫，收集洗脫液。

洗脫液50℃下氮氣至近干，1mL流動相溶解，進樣分析。

結果與討論

   由參考文獻可初步將流動相定為甲醇與超純水，從實驗結果可知：當只針對標準物質的測試時，使用純甲醇做流動相對雙酚A的響應效果，在檢測樣品含量時，我們可發(fā)現(xiàn)，以純甲醇作為流動相將會產生大量的溶劑峰，影響到樣品檢測結果，因此我們適當?shù)奶砑右欢ū壤乃?，降低流動相的洗脫能力，以避開溶劑峰的影響。由于3%的乙酸溶劑峰較大，因此將甲醇：水=75：25的流動相作為*流動相，其中可根據(jù)不同樣品的性質我們也可靈活利用色譜條件。

   波長的選擇: 經(jīng)過二級陣列管檢測器全波段掃描可知：雙酚A在200nm至400nm波長范圍內有三個zui大吸收峰，分別為200nm、224nm、280nm，由于考慮到流動相的影響，200nm在流動相甲醇的截至波長（210nm）內因此不予考慮，而雙酚A在224nm處的響應度比在280nm處的響應度高，因此將*波長選定為224nm。

陰性和系統(tǒng)適用性試驗

  不加入樣品，加入試劑，按樣品處理方法進行測定，在組分相應保留時間處沒有吸收；適當?shù)母纳V條件中的流速、流動相比例、色譜柱品牌檢測，均能符合相應的參數(shù)條件；其中取標樣10μl進樣檢測，雙酚A的理論板數(shù)大于7000。

 精密度和重現(xiàn)性實驗

  取雙酚A標準供試液，進樣6針，每次10ul，進行測定，考察該組分精密度及重現(xiàn)性的相對標準偏差，精密度相對標準偏差為0.49%，重現(xiàn)性相對標準偏差為0.095%。

線性關系和檢測限

  在本方法確定的色譜條件下，雙酚A濃度為0.1008ug/ml-1008.2ug/ml范圍內，線性關系良好，其峰面積-濃度的線性方程為：y = 10.537x+14.293，相關系數(shù)R2=0.9999；在 S/N =3的條件下，本方法zui低檢測限為0.038mg/kg。

 回收率試驗

  采用在實際樣品中加入不同添加水平的雙酚A標準溶液的方式進行回收率實驗，按前處理方法處理后分析，采用外標法定量，每個添加水平單獨測3次，實驗結果表明，其平均回收率為85.78%～98.12%，RSD為397％～6.63％。